O que é o leitor de microplacas ELISA?
O leitor de microplaca, ou seja, o ensaio imunoenzimático, é um instrumento especial para o ensaio imunoenzimático. Na verdade, é um colorímetro fotoelétrico especial ou espectrofotômetro disfarçado, e seu princípio básico de funcionamento é basicamente o mesmo que a estrutura principal e o colorímetro fotoelétrico. Ele pode ser simplesmente dividido em duas categorias, semiautomático e totalmente automático, mas seus princípios de funcionamento são basicamente os mesmos. Seu núcleo é um colorímetro, ou seja, o método colorimétrico é utilizado para analisar o conteúdo de antígeno ou anticorpo. A determinação de ELISA geralmente requer que o volume final da solução de teste seja inferior a 250μL e o teste não pode ser concluído com um colorímetro fotoelétrico geral, portanto, há requisitos especiais para o colorímetro fotoelétrico no leitor de microplaca.
Princípio
O leitor de microplaca é, na verdade, um colorímetro fotoelétrico ou espectrofotômetro para fins especiais disfarçado, e seu princípio básico de funcionamento é basicamente o mesmo da estrutura principal e do colorímetro fotoelétrico. A figura mostra o trabalho de um leitor de microplacas de amostragem automática de canal único. Diagrama esquemático. A onda de luz emitida pela lâmpada da fonte de luz é transformada em uma luz monocromática pelo filtro ou monocromador e entra na amostra em teste no pólo plástico microporoso. Parte da luz monocromática é absorvida pela amostra e a outra parte é transmitida através da amostra Iluminada para o fotodetector, o fotodetector converte os diferentes sinais de luz da amostra a ser testada em sinais elétricos correspondentes. Os sinais elétricos são processados por pré-amplificação, amplificação logarítmica e conversão analógico-digital. Entre no microprocessador para processamento de dados e cálculo e, finalmente, exiba os resultados no visor e na impressora. O microprocessador também controla o movimento do mecanismo de acionamento mecânico na direção X e direção Y para mover a microplaca através do circuito de controle, de modo a realizar o processo de detecção automática de amostragem. Outros leitores de microplaca usam o movimento manual da microplaca para detecção, portanto, o mecanismo de acionamento mecânico e o circuito de controle nas direções X e Y são omitidos, de modo que o instrumento é menor e a estrutura mais simples.
A microplaca é uma placa de plástico transparente especialmente utilizada para colocar a amostra a ser testada. A placa tem várias fileiras de pequenos orifícios de tamanho uniforme e o antígeno ou anticorpo correspondente está embutido no orifício. Cada pequeno orifício pode conter alguns dez mililitros de solução.
A luz é uma onda eletromagnética. O comprimento de onda de 100nm-400nm é chamado de luz ultravioleta, a luz entre 400nm e 780nm pode ser observada pelo olho humano e o comprimento de onda maior que 780nm é chamado de luz infravermelha. As pessoas só podem ver as cores porque a luz atinge o objeto e é refletida de volta pelo objeto. As plantas verdes são verdes porque a maioria das plantas absorve a luz laranja-avermelhada e a luz azul-violeta, mas não absorvem e refletem o verde, então as plantas parecem verdes. O princípio da medição do leitor de microplaca é detectar a absorbância do analito em um comprimento de onda específico.
Estrutura
Existem placas de 40 poços, placas de 55 poços, placas de 96 poços e assim por diante. Instrumentos diferentes usam placas de orifício diferentes, que podem ser testadas uma a uma ou fileira por fileira.
A luz monocromática utilizada pelo leitor de microplaca pode ser obtida por meio de um filtro coerente ou do mesmo monocromador do espectrofotômetro. Ao usar um filtro como dispositivo de filtro, é o mesmo que um colorímetro comum. Ele pode ser colocado na frente da microplaca ou atrás da microplaca. Após o condensador, o diafragma atinge o refletor, é refletido pelo refletor a 90 ° e passa pela solução colorimétrica verticalmente, e então enviado pelo filtro. Para a fotocélula.
A partir do diagrama de blocos de trabalho e do diagrama do caminho de luz do leitor de microplaca, pode-se ver que ele tem as seguintes diferenças com os colorímetros fotoelétricos comuns:
(L) O recipiente da solução colorimétrica a ser testada não utiliza mais uma cubeta, mas uma microplaca de plástico. A microplaca é geralmente feita de material de polietileno transparente, que tem um forte efeito de adsorção de antígeno e anticorpo, por isso é utilizada. Ela atua como um carreador de fase sólida.
⑵Como a microplaca de plástico que contém a amostra é porosa de várias fileiras, a luz só pode passar verticalmente, de modo que o feixe de luz do leitor de microplaca atravessa a solução a ser testada e a microplaca verticalmente. O feixe de luz pode ser de cima para baixo ou pode passar pelo fluido colorimétrico de baixo para cima.
⑶ Leitores de microplaca geralmente não usam apenas A, mas às vezes também usam densidade óptica OD para expressar absorbância. Os leitores de microplacas podem ser divididos em dois tipos: monocanal e multicanal, e o monocanal pode ser dividido em dois tipos: automático e manual. Tipo de instrumento automático Existe um mecanismo de acionamento mecânico nas direções X e Y, que pode enviar os pequenos orifícios da microplaca L um a um sob a viga para teste, e o tipo manual usa o movimento manual da microplaca para medição.
Com base no leitor de microplaca de canal único, foi desenvolvido um leitor de microplaca multicanal. Este tipo de leitor de microplaca geralmente é automatizado. Não possui múltiplos feixes e múltiplos fotodetectores, como um instrumento de 12 canais com 12 feixes ou 12 fontes de luz, 12 detectores e 12 amplificadores, sob a ação do dispositivo de acionamento mecânico na direção X, 12 amostras são detectadas em um fileira. A velocidade de detecção do leitor de microplaca multicanal é rápida, mas sua estrutura Os preços mais complexos também são maiores.
Alcance de aplicação do leitor de microplaca
Teste de hematologia Teste de anticorpos relacionados às plaquetas PAIgA, PAIgG, PAIgM
Determinação de D-Dimer D-Dimer
Determinação de produtos de degradação de fibrina sérica FDP
Determinação de T3, T4 com triiodotironina e tetraiodotironina
Teste imunológico de determinação de proteína C reativa CRP
Determinação de imunoglobulina IgD, IgE
Determinação de imunocomplexos circulantes CIC
Determinação do fator reumatóide IgG, IgA, IgM RF
Anticorpo anti-tireoglobulina, determinação de anticorpo microssomal TG, TM
Detecção imunológica de câncer de tumor Determinação de alfa-fetoproteína AFP
Determinação do antígeno carcinoembrionário CEA
Determinação do antígeno específico da próstata PSA
Determinação de câncer pancreático, câncer do trato biliar, câncer gástrico CA19-9
Determinação de câncer de ovário CA125
Determinação do câncer de mama CA15-3
Determinação de carcinoma espinocelular cervical CEC
Detecção de câncer de medula óssea múltiplo
Determinação de câncer de tireoide hTG
Teste imunológico para doenças infecciosas, teste sorológico para hepatite A, anti-HAV-IgM
Teste de sorologia para hepatite B dois pares e meio
Detecção de sorologia para hepatite C Anti-HAV-IgG, anti-HCV-IgM
Detecção sorológica de hepatite D Anti-HDV-IgG, anti-HDV-IgM
Detecção sorológica de hepatite E Anti-HEV-IgG
Detecção de anticorpos para febre hemorrágica com síndrome renal HFRS-IgG
Detecção de anticorpo IgM para o vírus da encefalite japonesa
Detecção de anticorpos contra o vírus da imunodeficiência humana (ou seja, AIDS regional) HIV β 2 M
Teste de função de cuidado pré-natal e pós-natal Teste do vírus Toxoplasma TOXO
RV de detecção do vírus da rubéola
Detecção de citomegalovírus CMV
Detecção de vírus herpes simplex Anti-HSV (Ⅰ, Ⅱ)
Outros também podem fazer testes genéticos e resíduos de animais, itens de inspeção de resíduos de pesticidas, etc.
